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徠卡快速高內涵熒光成像系統加速治療性抗體藥物研發

更新時間:2020-10-26      點擊次數:1419

應用專家 趙夢路
 
抗體藥物在免疫、腫瘤治療等多種應用中發揮越來越重要的作用,研究機構預測到2025年抗體藥物市場規模將達到3000億美元[1],下圖中紅色代表2018年使用量多的10種抗體藥物。


圖1 時間軸顯示從1975年開始研發成功的治療性抗體及應用


雖然抗體藥物市場巨大,但是每年通過FDA審核并成功上市的治療性抗體依然非常少,從下圖可以看出,上市藥物少的很大原因是治療性抗體藥物研發存在流程復雜、體外和體內藥效驗證困難等原因。

圖2 治療性抗體藥物臨床前研究路線


下圖可以看出傳統藥物篩選流程中沒有影像學方法,整個研發數據單一,必須拿到上一步的結果方可進行下一步的研究。而影像學方法可以進行高通量篩選,允許同時評估多個抗體分子的效力和毒性,關鍵一點是影像學方法在藥物篩選早期就可以拿到藥物有無毒性作用,可以預測藥物在人體的毒副作用,為更好的進行臨床研究提供數據支持[2]。

圖3 藥物序列篩選和并行篩選


Leica THUNDER 3D極速高內涵活細胞培養成像系統是Leica全新研發的寬場快速高分辨熒光成像系統,擁有成像速度快、分辨率高、應用范圍廣、光毒性低和Navigator高通量采集與自動化處理數據等優點。
 

優勢一 成像速度快

適合高通量快速篩選,視頻中使用THUNDER拍攝96孔板,每孔三色熒光成像加10層 Z stack,終3.5分鐘即可全部采集完成。

視頻1 THUNDER快速多通道熒光數據采集

 

視頻2 THUNDER自定義采集參數和隨機性設置


高速多通道采集只是獲取數據的前期步驟,自動化分析數據才能高效的獲取結果。THUNDER可在Navigator流程中添加自動分析步驟,讓數據采集完成自動進入分析流程,終將結果直接呈現出來,

圖4 Navigator高通量采集后自動進入分析模塊


優勢二 高分辨率

傳統寬場成像雖然可以快速采集數據,但是由于固有的光學結構無法有效濾除非焦信號造成的信號模糊、信噪比差,而點掃描共聚焦又受限于成像速度慢無法滿足高通量篩選的需求。THUNDER快速高分辨熒光成像系統,基于寬場成像一次拍照即可達到136nm的超高分辨率成像,THUNDER在滿足成像速度的同時具備高分辨率優勢,超高分辨率和高信噪比圖像使后期結構辨別、弱信號定量分析成為可能。

圖5 THUNDER分辨細胞核中的DNA損傷位點


傳統寬場顯微鏡由于非焦信號干擾和衍射極限的限制,無法分辨300nm以內距離較近的信號。圖5中的觀察病毒侵入細胞核中造成的損傷位點(黃色點信號),由于THUNDER在XY軸擁有136nm的超高分辨率,因此可以清楚分辨靠的比較近的損傷點,這一THUNDER圖像可以進行更加準確的定量分析。

圖6 神經細胞離體3D培養


在藥物研究領域,經常需要驗證藥物分子對細胞結構及存活的影響。THUNDER圖像具有高分辨率優勢,可以在藥物作用早期即可觀察到細胞精細結構的改變,從而更靈敏的捕獲藥物對細胞生長增殖的影響,為后期臨床研究提供數據支持。

圖7 高信噪比圖像助力細胞計數分析


圖像模糊,信噪比不足一直都是圖像后期分析的難題,THUNDER技術在細胞高通量計數分析方面,擁有天然的優勢,高分辨和高信噪比的圖像大大簡化了后期分析難度,可以更方便的進行自動分析。
 

優勢三 應用廣,適用細胞和模式動物

隨著技術的進步,抗體藥物臨床前研究已經不再局限在單細胞水平的療效驗證,而是涌現出越來越多的新技術滲透到活性分子的篩選中。由于抗體藥物在離體細胞中的代謝與在體內情況有很大不同,如何縮小作用環境的差距成為時下研究的熱點,比如可以通過類器官的構建來研究和體內相似的微環境及滲透屏障,可以在斑馬、魚線蟲等模式動物活體水平研究抗體藥物在體內環境的靶向性等等。這樣一系列復雜的模型都需要一種觀察深度大、應用范圍廣的成像技術,THUNDER恰好可以滿足這些需求。


視頻3 Pseudoislets (pancreatic beta cells)(pancreatic beta cMIN6 cells grown as pseudoislets ells). DAPI (blue), Insulin (Alexa488, green), membrane receptor (Alexa594, red), phalloidin (Alexa647, white).
Sample courtesy Dr. Rémy Bonnavion, MPI for Heart and Lung Research, Bad Nauheim


視頻中胰島類器官由于具有三維立體結構,所以熒光顯微鏡無法分辨胰島素分泌的具體情況,THUNDER高分辨成像解決了這一難題,同時THUNDER拍攝深度深的優點也讓整個類器官都可以清楚的觀察。

視頻4 Lung Organoid Mouse lung organoids derived from alveola stem and progenitor cells
20x Air through 1mm plastic bottom
Sample courtesy Dr. Pumaree Kanrai, MPI for Heart and Lung Research, Bad Nauheim (Germany).


肺類器官是培養中普通塑料培養板中的樣本,從參數可以看出THUNDER成像不僅可以清楚分辨肺泡細胞的位置,而且使用厚底培養容器和長工作距離物鏡不影響THUNDER高分辨拍攝,因此THUNDER可以拍攝幾乎所有培養容器,覆蓋單細胞到大體積類器官樣本,具有非常廣泛的應用范圍。

圖8 線蟲模式動物THUNDER成像


圖9 線蟲體細胞計數自動分析


在模式動物成像方面,THUNDER依然可以做到體細胞水平的成像,并且在大尺度深度采集后可以自動進行計數分析,方便評估藥物在體內代謝和對體細胞的毒性作用。


總結



THUNDER是Leica的超高分辨、高信噪比快速熒光成像系統,可以覆蓋單細胞、組織、類器官和活體動物等大部分研究領域。由于THUNDER具有快速高分辨的特點,因此所以可助力抗體藥物臨床前研究,可應用于治療性抗體藥物的體外細胞水平藥效篩選和體內活性藥效驗證等試驗,可助力抗體藥物活性篩選、殺傷效果驗證、早期細胞毒性發現等方面研究。
針對抗體研究中細胞遇到的細胞、類器官和活體模式動物等樣本,THUNDER倒置平臺和體視鏡平臺可以完美的覆蓋。而在分子水平,由于傳統光學衍射限制,無法直接觀察分子間的結合及相互作用強弱,Leica FALCON可以提供FLIM-FRET方案,可以超越衍射極限限制,實現分子水平相互作用檢測。基于熒光壽命系統的FRET檢測不受熒光染色、漂白等強度因素影響,可以更加準確的檢測分子間的相互作用。

參考文獻:
1. Development of therapeutic antibodies for the treatment of diseases. Luet al. Journal of Biomedical Science(2020) 27:1 
2. Cellular imaging in drug discovery. NATURE REVIEWS | DRUG DISCOVERY(2006)343:5

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